Hierdie artikel is die vertaalde weergawe en is beskikbaar gestel om ‘n breër lesersgroep te bereik. Die oorspronklike Engelse artikel is beskikbaar hier:
This article is the translated version, made available to provide access to a larger readership, of which the original English article is available here:
Tuberkulose is ’n hoogs aansteeklike siekte wat deur
Ons het 150 g vars bogrondse dele (blare en takke) van
Gedroogde bogrondse dele (blare en takke) van
Een liter 96% etanol is by 50 g plantmateriaal geroer en oornag gelaat. Die suspensie is die volgende dag deur filtreerpapier (Whatman nr. 1) filtreer en laat verdamp om ’n etanolekstrak te bied (oormatige etanol in die ekstrak is verwyder deur oornag in ’n dampkas met sterk lugvloei te laat). Nog 50 g plantmateriaal is gebruik om ’n 1:1 dichlorometaan:metanol-ekstrak (DCM:MeOH; 1,4 L) te berei. Dieselfde prosedure is gebruik as om die etanolekstrak te berei.
Die verbindings in die plantekstrak is met behulp van dunlaagchromatografie (DLC) ontleed deur aluminiumgesteunde DLC-chromatogramme te gebruik (Merck, silika jel 60 F254). Die DLC-chromatogramme is onder versadigde toestande ontwikkel met elk van die drie mobiele fases wat verskil wat polariteit betref, te wete: (1) chloroform:metanol:water:mieresuur (CMWM1) [60:15:2:1), (2) chloroform:metanol:water:mieresuur (CMWM2) [21:9:1:0,3) en (3) butanol:asynsuur:water (BAW) [21:6:3]. Die chromatogramme is onder ultravioletlig (254 nm en 365 nm) besigtig vir verbindings wat fluoresserend is. Dit is ook later met vanillien(Sigma)- swaelsuurreagens gespuit en verhit om die kleure van die verskillende verbindings in elke ekstrak sigbaar te maak.
Die chromatogramme is voorberei soos in die vorige afdeling beskryf en is dit in ’n dampkap uitgedroog. Die chromatogramme is met 1.2 % 2.2-difeniel-1-pikrielhidrasiel (DFPH) in metanol gespuit ten einde enige moontlike antioksidantverbindings in die geskeide plantekstrakte sigbaar te maak. Die bande/verbindings wat antioksidanteienskappe getoon het, is vergelyk met die bande wat antimikobakteriese aktiwiteit getoon het om te bepaal of die waargenome antimikrobiese eienskappe aan die antioksidanteienskappe van die ekstrakte toegeskryf kan word. Die teenwoordigheid van antioksidantverbindings is waargeneem deur geel kolle op ’n pers agtergrond op DLC-chromatogramme wat met 0.2 % DFPH in metanol gespuit is (Deby & Margotteaux
Die water- en etanolekstrakte is vir hierdie eksperiment gebruik en 25 mg van elke ekstrak is in ’n buisflessie afgeweeg en 2 mL HPLC-graad metanol is bygevoeg. Die mengsel is 10 min lank in ’n ultrasoniese bad geplaas en deur Acrodisc® GHP spuitfilters filtreer voordat dit in 2 mL HPLC-buisflessies geplaas is. Die onderskeie monsters is ontleed deur ’n WATERS HPLC heksiel-feniel skeidingsmodel te gebruik. Atlantis T3-kolomme (150 mm x 2.1 mm, 5 µ partikelgrootte) wat in serie gekoppel is, is vir die skeiding gebruik. UV-sigbare opsporing is gedoen op ’n WATERS PDA wat tussen 200 m en 500 nm kan skandeer. Die mobiele fase wat gebruik is, was 0.1 % (vol./vol.) mieresuur in water (A) en metanol (B). Die verhouding van die mobiele fase wat voorberei is, word in
brontemperatuur: 120 °C
optika: V-modus optika
desolvasietemperatuur: 450 °C
kapillêre spanning: 2500 V
keëlspanning: 20 V
ekstraksiekeëlspanning: 4 V
desolvasie: 800 L/h
keëlgas: 50 L/h
gas gebruik: stikstof
eindmassakalibrant: leusien-ensefalien 50 pg/mL oplossing in 50 % waterige asetoonnitriel (vloei gestel om 100 tot 200 ioontellings per sekonde te gee).
WATERS oplosmiddelbestuurtoestande.
Tyd (min) | Vloeikoers (mL/min) | %A: Mieresuur & H2O | %B: MeOH |
---|---|---|---|
0.00 | 0.4 | 70 | 30 |
1.00 | 0.4 | 70 | 30 |
8.00 | 0.4 | 70 | 30 |
9.00 | 0.4 | 70 | 30 |
25.00 | 0.4 | 70 | 30 |
25.10 | 0.4 | 0 | 100 |
28.00 | 0.4 | 70 | 30 |
29.00 | 0.4 | 70 | 30 |
Die inspuitingvolume was 3 mL en die tyd wat die eksperiment geloop het, was 30 min.
Bio-outografiese studies word, volgens Begue en Kline (
’n Kwantitatiewe antibakteriële aktiwiteitstoets is in 96-put mikrotiterplate uitgevoer, soos deur Eloff (
Die hoeveelheid monster wat ge-ekstraheer is word in
Verskillende hoeveelhede ongesuiwerde ekstrakte van
Massa van gemaalde blare (g) | Extraktant | Volume (L) | Hoeveelheid ekstrak (g) |
---|---|---|---|
50 | dH2O | 2 | 4.89 |
50 | 96% EtOH | 1 | 6.06 |
50 | DCM: MeOH 1:1 | 1.4 | 4.25 |
Die bepaling van DLC-vingerafdrukke is gebruik om die fitochemikalieë in die plantekstrak wat ge-ekstraheer is, te ontleed. Daar is drie oplosmiddels gebruik, te wete water, etanol en DCM:MeOH 1:1 (vol./vol.). Die ekstrak is weer met chloroform:metanol 1:1 (vol./vol.) opgelos tot ’n konsentrasie van 10 mg/mL. DLC-chromatogramme is met 10 mL van die voorbereide ekstrakoplossings gelaai en skeiding van die verskillende verbindings is waargeneem nadat die chromatogramme in CMWM1, CMWM2 en BAW ontwikkel is en met 0.1 mL vanillien-swaelsuur gespuit is soos in
Die DLC-chromatogramme (a, b en c) is van links na regs in CMWM1, CMWM2 en BAW ontwikkel. Die DLC-chromatogramme is met 0.1% vanillienswaelsuur gespuit om die skeiding van die verbindings sigbaar te maak en onder UV-lig besigtig. Aktiewe UV-bande is omkring. Die heel linkerkantse baan is die waterekstrak, die tweede baan die etanolekstrak en die derde baan is DCM:MeOH (1:1)-ekstrak.
‘n Kwalitatiewe antioksidanttoets is gedoen om die
Die DLC-chromatogramme (a, b en c) is van links na regs in CMWM1, CMWM2 en BAW ontwikkel. Die DLC-chromatogramme is met DFPH gespuit om die verbindings met antioksidantaktiwiteit (deur die gelerige sones aangedui) te toon. Die eerste baan is die waterekstrak, die tweede baan is die etanolekstrak en die derde is DCM:MeOH 1:1-ekstrak.
HPLC-MS-chromatogramme (
Chromatogramme wat ES− (a) en ES+ (b) profiele van die H2O-ekstrakte toon.
Chromatogramme wat die ES− (a) en ES+ (b) profiele van EtOH-ekstrakte toon.
MS-ES-negatiewe verteenwoordigers van molekulêre massa en retensietye van verbindings in
Retensietyd (minute) |
Molekulêre massa (Mw) (u) | Retensietyd (minute) |
|
---|---|---|---|
Waterekstrak |
Etanolekstrak |
||
2.22 | 341.0828 | 197.8026 | 2.04 |
4.73 | 136.0332 | 737.1725 | 5.32 |
6.14 | 739.1710 | 739.1683 | 6.17 |
6.16 | 739.1711 | 723.1759 | 8.03 |
6.22 | 739.1738 | 723.1757 | 8.06 |
6.25 | 739.1694 | 723.1833 | 8.60 |
6.31 | 739.1705 | 711.3950 | 9.93 |
8.02 | 723.1780 | 713.4065 | 11.42 |
8.59 | 723.1776 | 859.4781 | 13.33 |
8.63 | 723.1731 | 697.4159 | 14.60 |
8.66 | 723.1765 | 697.4172 | 14.65 |
9.93 | 711.3937 | 697.4197 | 14.75 |
11.44 | 713.4089 | 697.4115 | 16.34 |
11.47 | 713.4111 | 737.4095 | 16.62 |
14.57 | 697.3928 | 857.4552 | 17.48 |
14.63 | 697.4022 | 857.4502 | 17.49 |
14.98 | 697.4167 | 857.4583 | 17.50 |
16.33 | 697.4172 | 857.4546 | 17.53 |
18.42 | 697.4202 | 697.4153 | 18.43 |
19.49 | 695.4011 | 695.3979 | 19.50 |
19.51 | 695.3994 | 695.3971 | 19.51 |
20.25 | 679.4064 | 679.4059 | 20.26 |
20.94 | 679.4039 | 679.4080 | 20.94 |
21.68 | 697.4185 | 679.4127 | 20.95 |
21.70 | 697.4163 | 697.4180 | 21.70 |
21.73 | 697.4142 | 725.4563 | 22.11 |
22.11 | 693.4255 | 178.8363 | 25.63 |
, Retensietyd en molekulêre massa in verbindings wat in die waterekstrak gevind is;
, Retensietyd en molekulêre massa van verbindings wat in die etanolekstrak gevind is.
MS-ES positiewe verteenwoordigers van molekulêre massa en retensietye van verbindings wat in
Retensietyd (minute) |
Molekulêre massa (Mw) (u) | Retensietyd (minute) |
|
---|---|---|---|
Waterekstrak |
Etanolekstrak |
||
1.65 | 349.1833 | 141.9612 | 2.57 |
4.72 | 206.0480 | 689.3844 | 9.93 |
6.19 | 609.1339 | 691.3904 | 11.44 |
8.08 | 747.1559 | 837.4506 | 12.77 |
9.25 | 441.2381 | 675.3925 | 14.67 |
9.92 | 689.3722 | 675.3914 | 14.65 |
11.44 | 691.3840 | 675.3893 | 14.67 |
12.74 | 837.4393 | 675.9311 | 14.71 |
14.54 | 675.3962 | 675.3907 | 14.74 |
14.55 | 675.3954 | 675.3958 | 16.36 |
14.61 | 675.3917 | 761.3934 | 16.62 |
14.71 | 675.3939 | 835.4296 | 17.52 |
14.75 | 675.3943 | 835.4240 | 17.54 |
16.36 | 675.3883 | 675.3934 | 18.47 |
17.50 | 835.4254 | 673.3790 | 19.49 |
17.55 | 489.3510 | 673.3789 | 19.51 |
17.60 | 835.4218 | 673.3757 | 19.55 |
18.47 | 675.3939 | 301.1401 | 21.07 |
19.49 | 673.3784 | 308.2030 | 21.92 |
19.53 | 489.3553 | 337.233 | 23.99 |
19.54 | 673.3756 | 413.2640 | 25.09 |
20.27 | 657.3820 | 214.9169 | 27.81 |
20.66 | 759.3757 | 141.9634 | 28.51 |
21.91 | 675.3982 | - | - |
24.02 | 589.3860 | - | - |
, Retensietyd en molekulêre massa in verbindings wat in die waterekstrak gevind is;
, Retensietyd en molekulêre massa van verbindings wat in die etanolekstrak gevind is.
Nie een van die bio-outografiese toetse wat op die ongesuiwerde ekstrakte (H2O, EtOH en DCM:MeOH 1:1) uitgevoer is, het enige antimikobakteriese aktiwiteit teen
Die DCM:MeOH 1:1-ekstrak het die laagste minimum inhibisiekonsentrasie teen
Gemiddelde minimum inhibisiekonsentrasie (mg/mL) en totale aktiwiteit (mL/g) van ongesuiwerde ekstrakte van
Extraktante | Gemiddelde minimum inhibisiekonsentrasiewaardes (mg/mL) | Totale aktiwiteit (mL/g) |
---|---|---|
H2O | 1.04 | 4.70 |
Etanol | 0.52 | 4.69 |
DCM: MeOH (1:1) | 0.28 | 10.12 |
Gemiddeld | 0.61 | 6.50 |
DCM: MeOH, dichloromethaan:metanol.
Van die drie ekstraktante wat in hierdie studie gebruik is, was etanol die beste. Dit was in al drie ekstraksietye in staat om die grootste massa van die bogrondse plantmateriaal te onttrek. Gedistilleerde water het die minste plantmateriaal onttrek. ’n DLC is gebruik om die profiel van die ongesuiwerde ekstrakte en al die breuke van die verbindings wat in
Elke ongesuiwerde ekstrak is teen
Die antiosidantverbindings in difeniel-pikrielhidrasiel was as geel kolle teen ’n pers agtergrond sigbaar. Toe omkeerdefase DLC-chromatogramme met DFPH as opsporingsagent gebruik is, was die ontwikkelende kleur stabiel wat die identifisering van radikaal-suiwerende aktiwiteit na ’n paar minute moontlik gemaak het (
HPLC-analise is ’n analitiese prosedure wat meer sensitief en selektief vir natuurlike produkte is - nie net om die profiel van chemiese bestanddele van plante te bepaal nie, maar ook om geïsoleerde stowwe te kwantifiseer (Marques et al.
Ten slotte het hierdie studie en verskeie studies wat hierbo vermeld is, getoon dat
Ons wil graag die Wetenskaplike en Nywerheidsnavorsingsraad sowel as die Universiteit van Limpopo vir finansiële ondersteuning bedank.
Die outeurs verklaar dat hulle geen kompeterende belange het nie.
I.H.M. het die eksperimente gedoen en die eerste konsepartikel geskryf. R.H. het die eksperimente ontwerp. P.M het die protokol ontwerp en die analise van die eksperimente bestuur. Al die outeurs het die finale manuskrip gelees, teksversorg en goedgekeur.
Hoewel die aparaat se naam vertaalbaar is, word die Engelse afkorting wat algemeen in laboratoria gebruik word, HPLC, in die teks behou.